法醫DNA鑒定實驗常見問題解答
1、    Chelex配制需要注意哪些方面?     
推薦按每次檢驗的實際消耗少量配制,迅速用完。不推薦一次配制較大的體積,長時間使用。
 
2、    Identifiler,Identifiler   Plus,Identifiler Direct試劑盒包含的基因座相同嗎,引物序列相同嗎?    
基因座相同,引物序列相同。    

3、    Identifiler   Plus可否用于建庫樣品的檢測,同樣,Identifiler Direct等直擴試劑盒可否用于案件樣品的檢測?    

每種試劑盒都是按其應用,如案件和建庫,進行設計和優化的,因此都有其針對性,不建議將建庫試劑盒用于案件檢測,反之亦然。    

4、    Sinofiler與Huaxia試劑盒包含的基因座相同嗎,引物序列相同嗎?     

基因座相同,引物序列相同。  

5、    Yfiler與Yfiler   Direct試劑盒包含的基因座相同嗎,引物序列相同嗎?    
基因座相同,引物序列相同。  

6、    上面七款試劑盒,相同基因座的引物序列相同,這樣設計對案件檢測有哪些好處?    

好處在于對同一個體提供的檢材,相同基因座的檢測結果一定相同,極大的保持了檢測結果的一致性,便于以后的數據復核工作。

7、    新的CODIS多少基因座,包含哪些基因座?    
新的CODIS包括20個基因座:CSF1PO, D3S1358, D5S818, D7S820,   D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, FGA, TH01, TPOX, vWA, D1S1656,   D2S441, D2S1338, D10S1248, D12S391, D19S433, D22S1045。  

8、    GlobalFiler試劑盒包含哪些基因座?    
GlobalFiler試劑盒包含所有新的CODIS基因座,和SE33,Amelogenin,DYS391以及Y   indel。

9、    GlobalFiler試劑盒使用幾色熒光?    
使用Thermo Fisher公司的六色熒光(J6),即6-FAM, VIC, NED,   TAZ, SID, LIZ。    

10、    GlobalFiler   Express及GlobalFiler試劑盒有區別有哪些?    
兩款試劑盒包含的基因座相同,但GlobalFiler   Express試劑盒用于建庫直擴流程,而GlobalFiler用于案件檢測流程。GlobalFiler試劑盒的標準反應體系為25ul,   GlobalFiler Express試劑盒試劑盒的標準反應體系為15ul。 

11、    親子鑒定時,單獨使用Identifiler或Sinofiler試劑盒對于出現的基因座不符合情況難以判斷結果,該如何操作?    
建議增加檢測的基因座數,如同時使用Identifiler和Sinofiler,可將基因座增加到17個   (不包含性別基因座),如再增加GlobalFiler試劑盒,可將基因座增加至22個(不包含性別基因座)。   

12、    Yfiler Plus試劑盒包含哪些基因座?    
Yfiler   Plus試劑盒包含:DYS576,DYS389I,DYS635,DYS389II,DYS627,DYS460,DYS458,DYS19,GATA_H4,DYS448,DYS391,DYS456,DYS390,DYS438,DYS392,DYS518,DYS570,DYS437,DYS385a/b,DYS449,DYS393,DYS439,DYS481,DYF387S1a/b,DYS533。其中DYS576,DYS627,DYS518,DYS570,DYS449,   DYS387S1a/b 是快速突變基因座。    

13、    Yfiler Plus試劑盒使用幾色熒光?    
使用Thermo Fisher公司的六色熒光(J6),即6-FAM, VIC, NED,   TAZ, SID, LIZ。    

14、    Yfiler   Plus試劑盒是用于建庫檢測還是用于案件檢測?    
Yfiler Plus試劑盒在建庫直擴檢測和案件檢測流程上均做過驗證,全部流程都適用,但會選擇不同的循環參數,詳見說明書。   

15、    Yfiler Plus試劑盒擴增時間是多少?    
Yfiler Plus試劑盒擴增時間僅85分鐘,大大縮短PCR擴增時間。    

16、    華夏白金試劑盒包含哪些基因座?    
華夏白金試劑盒包含23個常染色體 STR   基因座(D3S1358, vWA, D16S539, CSF1PO, TPOX,D8S1179, D21S11, D18S51, Penta E,   D2S441, D19S433, TH01, FGA, D22S1045,D5S818, D13S317, D7S820, D6S1043,   D10S1248, D1S1656, D12S391, D2S1338,Penta D)和兩個性別標記基因座Y indel, Amelogenin。 

17、    華夏白金試劑盒使用幾色熒光?    
使用Thermo Fisher公司的六色熒光(J6),即6-FAM, VIC, NED,   TAZ, SID, LIZ。    

18、    華夏白金試劑盒是用于建庫檢測還是用于案件檢測?    
華夏白金試劑盒是用于建庫檢測的試劑盒。    

19、    華夏白金試劑盒擴增時間是多少?    
華夏白金試劑盒擴增時間僅45分鐘,大大縮短PCR擴增時間。  

20、    同一檢材樣本,相同的STR基因座,使用不同公司試劑盒檢測時,結果可能有差異?    
不同公司,采用的引物序列不同,對于某一樣品DNA,有可能在引物結合區域存在突變,導致PCR過程中引物無法退火,產生無效等位基因,最終導致檢測結果不一致。

21、    目前公司五色和六色STR試劑盒可用的LIZ內標有哪些?兩者有何區? 

目前有GeneScan? 500 LIZ?分子量內標和GeneScan? 600   LIZ?分子量內標。LIZ  600可以用于所有五色STR熒光試劑盒,如ID   Plus,Yfiler試劑盒等及六色STR熒光試劑盒,如GlobalFiler,GlobalFiler Express, Yfiler   Plus,華夏白金試劑盒等;而LIZ 500建議用于五色STR熒光試劑盒,如ID Plus,Yfiler試劑盒等。

22、    3500遺傳分析儀可以用來檢測六色熒光試劑盒嗎,3130遺傳分析儀呢?    
3500系列遺傳分析儀需要將數據收集軟件(Data Collection   v1.0)升級成為v2.0及以上版本的軟件,而3130系列遺傳分析儀需要將數據收集軟件(Data Collection   v3.0)升級成v4.0軟件才可以檢測六色熒光試劑盒。    

23、    六色熒光試劑盒數據使用哪款數據分析軟件才能分析?    
必須使用GeneMapper? ID-X v1.4及以上版本軟件才能進行正確分析。

24、    新定量試劑盒有哪些,作用分別是什么?    
新定量試劑盒包括Quantifiler? Trio Kit及Quantifiler? HP   Kit。Quantifiler?   Trio試劑盒用來定量人類總DNA量及男性DNA量,同時可以指示樣品的降解程度和抑制劑含量高低;而Quantifiler? HP   Kit定量人類總DNA量,同時可以指示樣品的降解程度和抑制劑含量高低。  

25、    新定量試劑盒(Trio、HP)與早期定量試劑盒(Human、Male和DUO)所適用的軟件版本是什么?    
新定量試劑盒(Trio、HP)只適用于HID   Real-Time PCR Analysis Software v1.2軟件。老定量試劑盒(Human、Male和DUO)適用于SDS系列版本軟件和HID   Real-Time PCR Analysis Software v1.0,v1.1及v1.2版本。 

26、    新定量試劑盒的擴增時間是多少?    

新定量試劑盒的擴增時間僅1小時,比早期定量試劑盒擴增時間縮短了半小時。

27、    新定量試劑盒與早期定量試劑盒相比有哪些優勢?    

新定量試劑盒具有更好的抗抑制能力及更低的檢測靈敏度,低值5pg,同時新增加的降解指數可以有效判斷樣品的降解情況,從而使操作人員能更準確地了解樣品信息,提高STR檢測成功率。   

28、    ProFlex PCR儀可提供哪些模塊?    
對法醫實驗室,有3種加熱模塊可供選擇,其中包括3×32孔獨立模塊(滿足小通量實驗室運行不同PCR反應程序的需求)、96孔模塊和雙96孔高通量模塊。     

29、    使用案件試劑盒時,陽性質控有時出現低峰或等位基因檢測不完全的情況,什么原因?   

在案件試劑盒25uL標準反應體系中,陽性質控推薦的加樣量為10uL(0.1   ng/uL)。目前很多實驗采用10或12.5 uL反應體系中加入1 uL(0.1   ng/uL)的陽性質控,致使陽性質控DNA濃度太低,出現低峰或丟基因座的情況。建議加大陽性質控的量以獲得最佳實驗結果。 

30、    使用STR試劑盒進行擴增時出現大片段基因座丟失的現象,9947A也出現這種情況,可能的原因有哪些?    
使用不規范耗材進行PCR擴增,反應液蒸發,體系減少導致。這種情況在使用小體系進行擴增時尤為嚴重。請使用推薦的耗材進行擴增,并使用標準的25uL反應體系進行擴增。

31、    遺傳分析儀配備UPS有什么好處?     
UPS在斷電后可以由電池供電,所以在斷電后還可以繼續使用儀器,避免由于外界不穩定因素引起的儀器部件損壞;同時,UPS還有穩壓、濾波的功能,可以保證實驗結果的穩定、可靠。 

32、    控制主機的電腦在維護中要注意哪些方面?     
不要更改計算機名,不要更改網卡IP地址的設置,不要安裝其它軟件。    

33、    連接遺傳分析儀的電腦為什么不能安裝第三方軟件以及殺毒軟件?    
第三方軟件的注冊碼信息會與Data   Collection軟件以及GeneMapper軟件的注冊碼發生沖突;另外,殺毒軟件會把Data   Collection軟件以及GeneMapper軟件的注冊碼當成病毒清除掉,從而致使軟件不能正常啟動。

34、    廠家擔保的毛細管使用次數是多少?     
16道毛細管為100次,4道為150次,8道和24道為160次。在擔保次數范圍內,如效期內的毛細管本身出現質量問題可以聯系當地的技術支持進行咨詢。  

35、    3500遺傳分析儀在更換新的毛細管之后需要進行光譜校正嗎?    

需要進行光譜校正,否則儀器無法運行。

36、    甲酰胺應該如何保存?     
首次使用時,分裝成小管,–20°C進行保存。分裝的量以2-3次用完為宜,避免反復凍融影響性能。

37、    POP4(35XX遺傳分析儀)384或960兩種型號的膠有時不夠預期的電泳樣品數目?    
可以滿足既定樣品數(384個樣品或60次進樣/8道或20次進樣/24道;960個樣品或120次進樣/8道或50次進樣/24道,以先到達的限定條件為準)進行電泳,但如果排氣泡的次數超過4次或進行其他向導(Wizard)次數太多,造成過多的膠浪費,就無法達到既定樣品的數目。    

38、    POP4保質期是多久?如何保存?    
31XX所使用的瓶裝POP4和35XX所使用的袋裝POP4保質期均為9個月。2℃~ 8℃進行保存,嚴禁–20℃保存。  

39、    剛從冰箱拿出來的POP膠有結晶,如何處理?    
POP膠里含有高濃度的尿素,低溫容易造成尿素的結晶,從冰箱拿出后室溫放置一段時間,晶體會消失,可以正常使用。 

40、    電泳時Ladder加樣頻率是如何規定的?    
按以下推薦進行加樣:   
加樣

41、    GeneMapper? ID-X v1.3及v 1.4軟件可以安裝在Microsoft? Windows? 7 Professional嗎?    
GeneMapper? ID-X v1.3及v1.4版本的軟件可以安裝在Microsoft? Windows? 7   Professional操作系統中,但必須是32位的操作系統。同時,v1.3版本的軟件也可以安裝在Windows Vista? Business,Windows XP Professional ,32位的操作系統中,v1.4版本的軟件也可以安裝在Windows XP   (SP3),32位的操作系統中。   

42、    GeneMapper? ID-X v1.5對安裝配置的要求?    

軟件安裝在Windows? 7 Professional(SP1),   64位操作系統中,不支持在Microsoft? Windows? 10 Professional系統上進行安裝。

建議電腦配置如下:    
– i3-3240 CPU @ 3.40GHz or newer    
– 8 GB RAM    
– 10 GB available on boot drive     
– DVD-ROM drive    
– 10/100 NIC with RWU (internal) or above installed    
– TCP/IP installed    
– Supported Operating Systems    
– Windows? 7 Professional, 64-bit (Service Pack 1)   

43、    GeneMapper? ID-X   系列軟件(如v1.4,v1.5)可以安裝在中文操作系統中嗎?
只支持英文操作系統的安裝。

44、    GeneMapper? ID-X 軟件為什么不能重復安裝?    

每個軟件均有唯一序列號(Registration   Code),如果在同一局域網內同時安裝一個序列號的軟件,軟件之間會發生沖突,致使軟件無法使用。  

45、    35XX與之前31XX和310遺傳分析儀電泳生成的文件格式相同嗎?    
不相同。31XX和310遺傳分析儀電泳生成的文件格式為.fsa,而35XX遺傳分析儀電泳生成的文件格式為.hid。    

46、    GeneMapper? ID-X   哪款軟件可以分析后綴為.hid的文件?    
GeneMapper? ID-X v1.2及以上版本的軟件可以分析.hid和.fsa的文件;而之前版本的軟件,包括GeneMapper? ID-X   v1.0,v1.0.1,v1.1和GeneMapper? ID 3.2.1,3.3軟件只能分析.fsa的文件。  

47、    GeneMapper? ID-X如何升級到最新版本(v1.5)?    
如果是GeneMapper? ID-X v1.3及以下版本,需要付費購買升級包;如果是GeneMapper? ID-X   v1.4,可以免費升級。具體請咨詢當地銷售人員。

48、    同一樣品數據用GeneMapper   ID 3.2.1或3.3分析沒有問題,但用GeneMapper? ID-X專家系統軟件分析就不能通過,什么原因?    
GeneMapper? ID 3.2.1、3.3和GeneMapper? ID-X專家系統都屬于數據分析軟件,但每款軟件的限定條件不同,GeneMapper? ID-X專家系統軟件設定的條件更為嚴格些,因此對數據質量的要求更高,結果更精確。    

49、    使用GeneMapper? ID-X軟件如何導出CODIS表格?    

樣品分析好后,不含有OL及其他雜峰,在GeneMapper? ID-X軟件界面的Table  Setting下拉菜單選擇CODIS Export,然后將要導出的樣品的Specimen   Category選擇Forensic Unknown(或根據實驗室具體檢材類型選擇),然后點擊File > Export Table for   CODIS。    

50、    需要備份哪些數據?     
建議必須備份的數據是后綴為.fsa或.hid的原始樣品文件,樣品分析后生成的.ser文件可以根據實驗室的要求確定是否需要備份。